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發(fā)布時(shí)間：2025/2/6
點(diǎn)擊次數(shù)：251LightCycler 480 II 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Roche Diagnostics）
一、設(shè)備概述
LightCycler 480 II 是 Roche Diagnostics 研發(fā)的一款高通量、全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）儀器。該設(shè)備采用創(chuàng)新的熱循環(huán)技術(shù)，結(jié)合先進(jìn)的熒光檢測系統(tǒng)，能夠顯著提高實(shí)驗(yàn)效率，同時(shí)確保高精度和高重復(fù)性的檢測結(jié)果。LightCycler 480 II 適用于基因表達(dá)分析、基因分型、突變檢測、病原體檢測等多種應(yīng)用，特別適合需要高精度定量和大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的研究需求。
二、主要特點(diǎn)
1. 高通量支持
LightCycler 480 II 支持 96 孔板和384 孔板兩種格式，滿足不同實(shí)驗(yàn)通量的需求。高通量能力使其特別適用于大規(guī)?；蚝Y選和臨床樣本檢測。
2. 創(chuàng)新的熱循環(huán)技術(shù)
該設(shè)備采用高效的銀合金模塊，確保熱傳遞的均勻性和快速升降溫能力。溫度均勻性對于PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，LightCycler 480 II 通過優(yōu)化熱循環(huán)系統(tǒng)，確保實(shí)驗(yàn)的高精度和重復(fù)性。
3. 多通道熒光檢測
LightCycler 480 II 具備 5 個(gè)熒光檢測通道，能夠同時(shí)檢測多種熒光染料，包括 SYBR Green、TaqMan 探針等。其靈敏的光學(xué)系統(tǒng)能夠高效檢測熒光信號(hào)，使得多重PCR（Multiplex PCR）成為可能，大幅提高實(shí)驗(yàn)效率。
4. 精確的定量分析
LightCycler 480 II 能夠進(jìn)行絕對定量、相對定量、基因分型、溶解曲線分析等實(shí)驗(yàn)，適用于多種研究領(lǐng)域。其強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件支持標(biāo)準(zhǔn)曲線法、ΔΔCt 法等不同定量分析方法，確保數(shù)據(jù)的可靠性。
5. 直觀的軟件界面
配套的 LightCycler 軟件提供直觀的操作界面，可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)采集、擴(kuò)增曲線分析、基因分型等功能。該軟件還能自動(dòng)生成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，簡化數(shù)據(jù)管理流程。
6. 適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求
LightCycler 480 II 兼容多種熒光探針、染料和 PCR 反應(yīng)體系，能夠靈活適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求，如：
基因表達(dá)分析
基因分型
突變檢測
病原體檢測
藥物篩選
三、應(yīng)用領(lǐng)域
1. 基因表達(dá)分析
LightCycler 480 II 通過實(shí)時(shí)熒光檢測，精準(zhǔn)量化基因表達(dá)水平，適用于研究細(xì)胞信號(hào)通路、疾病機(jī)制及藥物作用。
2. 基因分型
該設(shè)備可用于 SNP（單核苷酸多態(tài)性）檢測和等位基因分型，廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)研究和個(gè)性化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
3. 突變檢測
可用于檢測腫瘤相關(guān)基因突變、病毒變異株等。高靈敏度的熒光檢測系統(tǒng)確保微量突變的準(zhǔn)確識(shí)別。
4. 病原體檢測
LightCycler 480 II 可用于檢測病毒、細(xì)菌和其他病原微生物，特別適用于臨床診斷和公共衛(wèi)生監(jiān)測。
5. 藥物篩選
可用于篩選影響基因表達(dá)的候選藥物，評估藥物的作用機(jī)制。
四、操作流程
樣本準(zhǔn)備
提取 DNA/RNA
進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄（如 RNA 需要轉(zhuǎn)錄為 cDNA）
PCR 反應(yīng)體系配置
添加 PCR 反應(yīng)緩沖液、熒光探針/染料、酶、引物等
配置標(biāo)準(zhǔn)曲線（如需要）
裝載樣本
使用 96 孔或 384 孔 PCR 板
進(jìn)行密封，防止蒸發(fā)
設(shè)置 PCR 程序
配置擴(kuò)增步驟，如變性、退火、延伸等
選擇檢測通道和數(shù)據(jù)采集模式
運(yùn)行 PCR 反應(yīng)
啟動(dòng) LightCycler 480 II
實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)，記錄擴(kuò)增曲線
數(shù)據(jù)分析
生成擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線、Ct 值分析等
輸出實(shí)驗(yàn)報(bào)告
五、維護(hù)與保養(yǎng)
為了保持 LightCycler 480 II 的最佳性能，建議定期進(jìn)行以下維護(hù)：
清潔光學(xué)組件
使用適當(dāng)?shù)那鍧嵢軇┎潦脵z測模塊，避免灰塵影響熒光檢測。
溫控系統(tǒng)校準(zhǔn)
定期進(jìn)行溫度均一性測試，確保加熱模塊工作正常。
軟件升級
確保 LightCycler 軟件版本最新，以獲得最新的數(shù)據(jù)分析功能。
日常檢查
運(yùn)行空白實(shí)驗(yàn)，確保儀器沒有背景熒光污染。
六、技術(shù)參數(shù)一覽
| 參數(shù) | 規(guī)格 |
|---|---|
| 適用板型 | 96 孔、384 孔 |
| 熒光檢測通道 | 5 個(gè)通道 |
| 兼容熒光染料 | SYBR Green、TaqMan 探針、FAM、HEX、ROX、Cy5 |
| 溫度均勻性 | ± 0.1°C |
| 反應(yīng)體積 | 10 - 100 µL（96 孔）；5 - 20 µL（384 孔） |
| 數(shù)據(jù)分析 | 絕對定量、相對定量、基因分型、溶解曲線 |
| 軟件 | LightCycler 軟件 |
| 通量 | 高通量支持 |
七、總結(jié)
LightCycler 480 II 是一款高通量、高精度的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀器，特別適用于需要進(jìn)行大規(guī)模樣本分析的實(shí)驗(yàn)室。其先進(jìn)的熱循環(huán)技術(shù)、靈敏的熒光檢測系統(tǒng)和直觀的軟件操作界面，使其成為分子生物學(xué)研究、臨床診斷和藥物篩選等領(lǐng)域的重要工具。無論是基因表達(dá)分析、基因分型，還是病原體檢測，LightCycler 480 II 都能提供可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為科學(xué)研究和醫(yī)療應(yīng)用提供有力支持
